IL-2Rγ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401876-ACT

IL2RG codifica a cadeia gama comum (IL‑2Rγ, CD132), uma subunidade de sinalização compartilhada por múltiplos receptores de citocinas, incluindo IL‑2, IL‑4, IL‑7, IL‑9, IL‑15 e IL‑21. Após a ligação da citocina, a IL‑2Rγ coopera com outras cadeias do receptor para desencadear a ativação de JAK1/JAK3 e a sinalização subsequente via STAT, coordenando o desenvolvimento, a sobrevivência e a diferenciação efetora de linfócitos. Essa via é central para a biologia de células T, células NK e células B e molda a homeostase imune de forma mais ampla por meio de programas transcricionais responsivos a citocinas. A interrupção ou desregulação da sinalização associada a IL2RG está ligada a fenótipos de imunodeficiência profunda e oferece um eixo tratável para estudar dependências de redes de citocinas em células imunes humanas.

IL-2Rγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL2RG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-2Rγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL2RG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL2RG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-2Rγ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL2RG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-2Rγ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-2Rγ em células tumorais com expressão de IL2RG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.