IL-23R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403591-ACT

O IL23R humano codifica a subunidade do receptor de IL-23, a IL-23R, um componente essencial do complexo receptor de IL-23 que liga a detecção de IL-23 à sinalização intracelular via JAK/STAT, sobretudo a programas de transcrição conduzidos por STAT3. A expressão de IL-23R em células T ativadas e em populações linfoides inatas sustenta redes de citocinas associadas a Th17 e coordena respostas da barreira epitelial e da imunidade mucosa. Por meio da regulação de citocinas efetoras e da expressão de genes inflamatórios, o IL23R contribui para a diferenciação, o tráfego e a inflamação tecidual de células imunes. Estudos genéticos e de expressão implicam a desregulação da via de IL23R em doenças inflamatórias imunomediadas, tornando-o um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de sinalização por citocinas.

IL-23R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL23R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-23R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL23R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL23R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-23R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL23R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-23R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-23R em células tumorais com expressão de IL23R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.