Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
IL-1RAcP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421101
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IL-1RAcP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IL-1RAcP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IL-1RAcP Anticuerpo (D-5): sc-376872
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IL-1RAcP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421101 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Il1rap codifica IL-1RAcP, un correceptor esencial que forma complejos con miembros de la familia de receptores de IL-1 para propagar las señales iniciadas por IL-1α/IL-1β y ligandos relacionados. Tras la unión al receptor, IL-1RAcP favorece el ensamblaje de complejos de señalización dependientes de MyD88 que activan las cascadas IRAK–TRAF6, lo que conduce a la activación de las vías NF-κB y MAPK y a programas transcripcionales posteriores que controlan la inflamación, las respuestas inmunitarias innatas y la comunicación entre el estroma y el sistema inmunitario. En modelos murinos, la alteración de la señalización IL-1R/IL-1RAcP se utiliza con frecuencia para estudiar los mecanismos que impulsan estados inflamatorios crónicos, respuestas a lesión tisular y remodelación amplificada por citocinas en diversos sistemas orgánicos. Dado que IL-1RAcP integra múltiples señales de la familia de IL-1, es relevante para desentrañar el crosstalk entre vías que determina el reclutamiento de leucocitos, la función de barrera y la expresión génica inflamatoria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IL-1RAcP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Il1rap en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Il1rap junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Il1rap tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IL-1RAcP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Il1rap para la investigación de la señalización de IL-1RAcP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Il1rap críticos para la función de IL-1RAcP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Il1rap para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IL-1RAcP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IL-1RAcP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Il1rap. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IL-1RAcP (m) y el plásmido HDR IL-1RAcP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Il1rap para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Il1rap definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.