IL-15Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421090-ACT

Il15ra codifica a cadeia alfa do receptor de interleucina-15 de camundongo (IL-15Rα), um componente de ligação de alta afinidade que apresenta IL-15 em trans a complexos IL-2/15Rβ–γc em células imunes vizinhas. Esse eixo é central para o desenvolvimento e a sobrevivência de células NK, a homeostase de células T CD8+ de memória e a modulação de respostas imunes inatas e adaptativas por meio da sinalização JAK/STAT. A sinalização dependente de IL-15Rα influencia o tráfego de linfócitos e programas de ativação, tornando a regulação de Il15ra relevante para estudos de inflamação, patologia imunomediada e imunologia tumoral. Alterações na atividade de IL-15/IL-15Rα foram associadas a redes de citocinas desreguladas e expansão aberrante de células imunes em diversos modelos de doença.

IL-15Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il15ra sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-15Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il15ra em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il15ra, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-15Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il15ra nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-15Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-15Rα em células tumorais com expressão de Il15ra silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.