IL-12B p40 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401407-ACT

A IL12B humana codifica a subunidade p40, compartilhada pelas citocinas heterodiméricas IL-12 (p35/p40) e IL-23 (p19/p40), posicionando a IL12B como um regulador central da comunicação imune entre a imunidade inata e a adaptativa. A sinalização dependente de p40 por meio dos complexos IL-12R e IL-23R ativa vias JAK/STAT, moldando a polarização Th1 e Th17, a indução de interferon-γ e redes de citocinas inflamatórias em células mieloides e linfoides. Alterações na expressão de IL12B ou desequilíbrios nessa via têm sido associadas a uma defesa do hospedeiro desregulada e a fenótipos inflamatórios crônicos, tornando-a relevante para estudos de biologia de infecções, inflamação granulomatosa e patologia imune impulsionada por citocinas. Esse gene é frequentemente investigado em modelos de ativação de macrófagos e células dendríticas e em sistemas de co-cultura que avaliam a diferenciação de células T e a função efetora.

IL-12B p40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL12B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-12B p40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL12B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL12B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-12B p40. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL12B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-12B p40 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-12B p40 em células tumorais com expressão de IL12B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.