IL-10Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402486-ACT

IL10RA codifica a subunidade alfa do recetor de interleucina-10 (IL-10Rα), um componente de ligação a citocinas de alta afinidade que se associa a IL10RB para formar o complexo funcional do recetor de IL-10. Após a ligação de IL-10, o recetor ativa a sinalização JAK1/TYK2 e, a jusante, programas de transcrição dependentes de STAT3 que restringem a produção de citocinas inflamatórias, limitam a ativação de células apresentadoras de antigénio e sustentam a regulação imunitária protetora dos tecidos. A função de IL-10Rα é, portanto, central para a homeostase de macrófagos e células dendríticas, para a tolerância imunitária associada à barreira epitelial e para a resolução da inflamação. A desregulação da sinalização ligada a IL10RA está associada a ativação imunitária aberrante e patologia inflamatória, tornando-a relevante para estudos de imunologia das mucosas, autoimunidade e interações hospedeiro–microbiota.

IL-10Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL10RA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-10Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL10RA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL10RA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-10Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL10RA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-10Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-10Rα em células tumorais com expressão de IL10RA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.