IGFBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400915-ACT

A proteína 1 ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina (IGFBP1) é um regulador secretado da biodisponibilidade de IGFs que modula a sinalização de IGF1/IGF2 ao se ligar aos ligantes e influenciar sua interação com os receptores de IGF. Ela contribui para a homeostase endócrina e metabólica, integrando sinais do estado nutricional, da sinalização de insulina e de programas transcricionais hepáticos para moldar a atividade a jusante das vias PI3K–AKT e MAPK. A IGFBP1 também afeta decisões de crescimento e sobrevivência celular de maneira dependente de IGF e pode interagir com componentes da matriz extracelular para influenciar a remodelação tecidual. A expressão alterada de IGFBP1 tem sido associada à desregulação metabólica e é frequentemente avaliada em estudos de fisiologia hepática, inflamação e contextos de sinalização associados ao câncer.

IGFBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IGFBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGFBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IGFBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IGFBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGFBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IGFBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGFBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGFBP1 em células tumorais com expressão de IGFBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.