Plásmido CRISPR de Activación (m) IGF-II: sc-421058-ACT

El gen Igf2 del ratón codifica el factor de crecimiento similar a la insulina II (IGF‑II), un factor de crecimiento secretado que señala principalmente a través de IGF1R y de la isoforma A del receptor de insulina para regular el crecimiento embrionario y placentario, la proliferación celular, la supervivencia y la homeostasis metabólica. IGF‑II activa las vías PI3K–AKT–mTOR y RAS–RAF–MEK–ERK aguas abajo, influyendo en la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y el aprovechamiento de nutrientes. Igf2 es un locus sometido a impronta genómica con una expresión del desarrollo estrechamente controlada, y la desregulación de la señalización de IGF‑II se ha relacionado con fenotipos de crecimiento anómalos, cambios en la regeneración tisular y procesos oncogénicos en múltiples contextos. En modelos murinos, la alteración de Igf2 se utiliza ampliamente para estudiar el control del crecimiento, la regulación epigenética de la impronta y la comunicación cruzada de la señalización con los ejes de insulina/IGF.

IGF-II El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Igf2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGF-II El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Igf2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Igf2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGF-II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Igf2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGF-II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGF-II en células tumorales con expresión de Igf2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.