IGF-II CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421058-ACT

マウスのIgf2はインスリン様成長因子II（IGF-II）をコードしており、IGF-IIは分泌型の成長因子として主にIGF1Rおよびインスリン受容体アイソフォームAを介してシグナルを伝達し、胚および胎盤の成長、細胞増殖、生存、ならびに代謝恒常性を調節します。IGF-IIは下流のPI3K–AKT–mTOR経路およびRAS–RAF–MEK–ERK経路を活性化し、細胞周期の進行、分化プログラム、栄養利用に影響を与えます。Igf2は発生段階に応じた発現が厳密に制御されるインプリンティング遺伝子座であり、IGF-IIシグナルの破綻は、異常な成長表現型、組織再生の変化、さらには複数の状況における腫瘍形成過程と関連づけられています。マウスモデルでは、Igf2の改変は成長制御、インプリンティングのエピジェネティック制御、ならびにインスリン/IGF軸とのシグナルクロストークを研究するために広く用いられています。

IGF-II CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Igf2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IGF-II CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Igf2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIgf2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IGF-IIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIgf2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIGF-II依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIgf2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIGF-II経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。