IFN-ω Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409162-ACT

IFNW1 codifica o interferon ômega (IFN-ω), um interferon do tipo I que contribui para a defesa antiviral inata e para a vigilância imunológica. O IFN-ω sinaliza por meio do complexo receptor IFNAR para ativar as vias JAK–STAT e induzir genes estimulados por interferon (ISGs), que regulam a restrição viral, a apresentação de antígenos e a modulação de programas inflamatórios. Sua atividade se cruza com vias de detecção de ácidos nucleicos, como RIG-I/MDA5 e cGAS–STING, que coordenam respostas transcricionais à infecção e ao estresse celular. A desregulação da sinalização de interferon tipo I, incluindo a expressão aberrante de IFN-ω, é relevante em estudos de inflamação crônica, autoimunidade e interações tumor–imunidade, nas quais redes gênicas impulsionadas por interferon moldam fenótipos celulares.

IFN-omega O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNW1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-omega O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNW1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNW1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-omega. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNW1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-omega no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-omega em células tumorais com expressão de IFNW1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.