IFN-γRα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401191-ACT

IFNGR1 は、ヒトのインターフェロンγ受容体α鎖（IFN-γRα）をコードしており、細胞表面でインターフェロンγシグナル伝達を開始するリガンド結合サブユニットです。IFN-γ が結合すると、IFN-γRα は IFNGR2 と協調して JAK1/JAK2 および下流の STAT1 を活性化し、抗原提示、マクロファージ活性化、ならびに抗菌・炎症応答を制御する転写プログラムを駆動します。この経路は IRF/ISG ネットワークと連携し、免疫監視や組織炎症に影響を与えるサイトカイン間クロストークを形成します。IFNGR1 シグナルの制御異常は、宿主防御の変化や免疫介在性病態と関連づけられており、感染生物学、炎症、免疫腫瘍学シグナルの機序研究において重要です。

IFN-γRα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFNGR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFN-γRα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFNGR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFNGR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFN-γRαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFNGR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFN-γRα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFNGR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFN-γRα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。