Plásmido Doble Nickase (m) IFN-α/βRβ: sc-421048-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)IFN-α/βRβ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IFN-α/βRβ (m) y el plásmido de doble nickasa IFN-α/βRβ (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ifnar2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IFN-α/βRβ Anticuerpo (F-7): sc-137209
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) IFN-α/βRβ | sc-421048-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ifnar2 codifica la subunidad beta del receptor de interferón alfa/beta (IFN-α/βRβ), un componente central del complejo receptor de interferón de tipo I, necesario para las respuestas celulares a IFN-α e IFN-β. La unión del ligando inicia cascadas de fosforilación dependientes de JAK1/TYK2 que activan STAT1/STAT2 e IRF9 para formar ISGF3, impulsando la transcripción de genes estimulados por interferón que regulan la restricción antiviral, la presentación de antígenos y la programación de la inmunidad innata. La señalización de IFNAR2 se intersecta con las vías de NF-κB y MAPK para modular la producción de citocinas y la diferenciación de células inmunitarias. La desregulación de la señalización de interferón de tipo I se asocia con fenotipos inflamatorios y autoinmunes e influye en las interacciones tumor–sistema inmunitario, lo que convierte a Ifnar2 en un objetivo frecuente para estudios mecanísticos de redes de señalización inmunitaria.
IFN-α/βRβ El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ifnar2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ifnar2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ifnar2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ifnar2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.