IFIT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403557-ACT

テトラトリコペプチドリピート3（IFIT3）を有するインターフェロン誘導タンパク質は、I型インターフェロンおよびパターン認識受容体シグナル伝達の下流で自然免疫性の抗ウイルス防御を増幅する、インターフェロン刺激遺伝子（ISG）産物である。IFIT3は細胞質内のIFIT複合体の一部として機能し、翻訳およびRNAセンシングを調節することで、ISG誘導、JAK–STATシグナル伝達の出力、ならびに炎症性転写プログラムに影響を及ぼす。インターフェロン応答の強度と持続性を形作ることから、IFIT3は宿主—病原体相互作用、免疫制御、インターフェロン駆動性の細胞ストレスの文脈でしばしば研究対象となっている。IFIT3発現の調節異常は免疫微小環境や炎症状態の変化と関連付けられており、感染生物学や免疫関連疾患プロセスの機序研究における重要性を裏付けている。

IFIT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFIT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IFIT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFIT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFIT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IFIT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFIT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIFIT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFIT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIFIT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。