IDO Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421024-ACT

O gene **Ido1** em camundongos codifica a indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO), uma enzima dependente de heme que catalisa a primeira etapa — e limitante da velocidade — do catabolismo do triptofano pela via da quinurenina. Ao regular a disponibilidade local de triptofano e gerar metabólitos bioativos da quinurenina, a IDO influencia a ativação de células imunes, a apresentação de antígenos e programas de sinalização inflamatória, incluindo vias ligadas à atividade do receptor de hidrocarbonetos arílicos (AHR) e às respostas de estresse celular. A expressão de **Ido1** é comumente induzida por interferon-γ e outros sinais inflamatórios, conectando-a a mecanismos de tolerância imunológica e homeostase tecidual. A desregulação da atividade da IDO tem sido associada à evasão imune tumoral, à inflamação relacionada a infecções crônicas, à regulação imune ligada à autoimunidade e a processos neuroinflamatórios, tornando-a um alvo útil para pesquisas em imunometabolismo.

IDO O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ido1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IDO O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ido1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ido1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IDO. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ido1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IDO no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IDO em células tumorais com expressão de Ido1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.