ICAM-1/CD54 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400098-ACT

ICAM1 codifica a molécula de adesão intercelular 1 (ICAM-1/CD54), um recetor induzível da superfamília das imunoglobulinas, expresso em células endoteliais e epiteliais e em muitos leucócitos. A ICAM-1 liga-se a integrinas β2 como a LFA-1 (ITGAL/ITGB2) e a Mac-1 (ITGAM/ITGB2) para mediar a adesão firme, a migração transendotelial e a formação de sinapses imunológicas. A sua expressão é fortemente aumentada por estímulos inflamatórios, incluindo TNF-α e IL-1, através de programas dependentes de NF-κB e MAPK, ligando o ICAM1 ao tráfego de leucócitos e à inflamação vascular. A atividade e a expressão desreguladas de ICAM1 estão associadas a estados inflamatórios crónicos, patologia autoimune, processos ateroscleróticos e interações tumor–imunidade, tornando-o um alvo útil para estudar a adesão celular e a sinalização induzida por citocinas.

ICAM-1/CD54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ICAM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ICAM-1/CD54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ICAM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ICAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ICAM-1/CD54. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ICAM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ICAM-1/CD54 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ICAM-1/CD54 em células tumorais com expressão de ICAM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.