Hus1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403287-ACT

ヒトHUS1は、ゲノム監視を統括するために損傷DNA上へロードされる9-1-1チェックポイントクランプ（RAD9A–RAD1–HUS1）の中核構成因子であるHus1をコードする。この複合体はATR依存性シグナル伝達を促進し、複製フォークの安定化を支えるとともに、TOPBP1などのメディエーターや複数の修復因子との相互作用を介してDNA修復経路の選択を助ける。DNA損傷の検知を細胞周期チェックポイント制御へ結び付けることで、Hus1は複製に伴うゲノム不安定性を抑制する。9-1-1/ATRチェックポイント過程の制御異常は、突然変異負荷、染色体不安定性表現型、がん生物学や遺伝性のゲノム維持疾患に関連するDNA損傷応答欠損の文脈で、しばしば研究対象となっている。

Hus1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HUS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Hus1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HUS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHUS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Hus1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHUS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHus1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHUS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHus1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。