HuB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400169

Visão geral

ELAVL2 (HuB) é uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurónios, da família ELAV/Hu, que reconhece elementos ricos em AU para regular o processamento de pré-mRNA, a estabilidade, a localização e a tradução do mRNA. Ao moldar programas de expressão génica pós-transcricionais, a HuB contribui para a diferenciação neuronal, o desenvolvimento sináptico e a plasticidade dependente da atividade, através do controlo de transcritos envolvidos na neurogénese e na dinâmica do citoesqueleto. Os regulões de RNA associados à ELAVL2 intersetam vias que governam a especificação do destino celular e as respostas ao stress, e foram descritos padrões de expressão alterados em contextos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, bem como em algumas neoplasias do sistema nervoso. Estas características fazem da ELAVL2 um nó útil para dissecar como o metabolismo do RNA influencia a identidade neuronal e a disfunção.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HuB (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ELAVL2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ELAVL2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ELAVL2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HuB.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ELAVL2 para a investigação da sinalização de HuB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ELAVL2 críticos para a função HuB
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ELAVL2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HuB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HuB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ELAVL2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HuB Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HuB (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ELAVL2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ELAVL2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.