HSP70-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417733-NIC

HSPA1B は、誘導型ヒートショックタンパク質である HSP70-2 をコードしており、プロテオスタシスを維持するために、新生タンパク質やストレスによって変性したタンパク質を安定化させる、ATP 依存性の中核的分子シャペロンです。HSP70-2 は、HSF1 によって制御される転写を介してヒートショック応答に関与し、共シャペロン、ユビキチン–プロテアソーム系、およびオートファジー経路と連携しながら、フォールディング、リフォールディング、ならびに分解に回すかどうかの選別（トリアージ）の意思決定を調整します。タンパク質凝集を抑制し、ストレスシグナル伝達を調節することで、HSP70-2 はプロテオトキシック、酸化、炎症性のストレス条件下における細胞生存に影響を与えます。HSP70 ネットワーク活性の異常な制御は、神経変性、がん細胞のストレス適応、免疫シグナル伝達の攪乱など、さまざまな疾患関連の文脈において、ストレス耐性やタンパク質恒常性の変化と関連づけられています。

HSP70-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSPA1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSPA1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSPA1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSPA1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。