Plásmido Doble Nickase (h) HSP 40: sc-402810-NIC

DNAJB1 codifica la co-chaperona humana HSP40, que regula el ciclo de ATPasa de HSP70 y promueve el plegamiento, replegamiento y la clasificación de clientes mal plegados durante el estrés proteotóxico. Mediante la estimulación de HSP70 mediada por su dominio J, HSP40 sostiene redes citosólicas de proteostasis que se conectan con la respuesta a proteínas mal plegadas, la señalización de choque térmico y los mecanismos de control de calidad mediados por el sistema ubiquitina–proteasoma y por la autofagia. La actividad de DNAJB1 influye en la maduración y estabilidad de diversas proteínas de señalización, vinculando la capacidad de chaperonas con el control del ciclo celular y programas transcripcionales de adaptación al estrés. La función alterada de chaperonas o la expresión desregulada de DNAJB1 se ha asociado con desequilibrios en la proteostasis y fenotipos relevantes para enfermedad, incluida la neurodegeneración y contextos de estrés oncogénico, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la homeostasis proteica.

HSP 40 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNAJB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNAJB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNAJB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNAJB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.