HSP 40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402810

Panoramica

DNAJB1 codifica il co-chaperone umano HSP40 (omologo di DnaJ, sottofamiglia B, membro 1), un regolatore chiave della proteostasi che stimola l’attività ATPasica di HSP70 per promuovere il ripiegamento, il ri-ripiegamento e lo smistamento delle proteine cliente ripiegate in modo errato. Attraverso un’interazione con HSP70 dipendente dal suo dominio J, HSP40 sostiene il controllo di qualità delle proteine nel citosol, le risposte allo stress e il coordinamento della degradazione assistita dai chaperoni tramite il proteasoma e vie collegate all’autofagia. La funzione di DNAJB1 è rilevante per la resilienza cellulare durante lo shock termico e altri stress proteotossici, e reti di chaperoni alterate sono frequentemente implicate nei disturbi da aggregazione proteica e nell’adattamento allo stress oncogenico. Un evento ricorrente associato a malattia che coinvolge DNAJB1 è la fusione DNAJB1–PRKACA osservata nel carcinoma fibrolamellare, che evidenzia il valore di modelli incentrati su DNAJB1 per studiare la biologia dei chaperoni in contesti genetici definiti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HSP 40 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAJB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAJB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAJB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HSP 40.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAJB1 per lo studio della segnalazione di HSP 40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNAJB1 critici per la funzione di HSP 40
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAJB1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HSP 40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HSP 40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAJB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HSP 40 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HSP 40 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAJB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAJB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.