hSNF2H Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403825-ACT

SMARCA5 codifica o remodelador de cromatina humano dependente de ATP do tipo ISWI, hSNF2H, uma subunidade catalítica que reposiciona nucleossomos para regular a acessibilidade da cromatina. O hSNF2H dá suporte à replicação e ao reparo do DNA, ao controle transcricional e à organização da cromatina em níveis superiores por meio de complexos de remodelamento como ACF, CHRAC, WICH e RSF. Ao coordenar o espaçamento entre nucleossomos e facilitar a montagem de cromatina acoplada à replicação, SMARCA5 influencia a progressão do ciclo celular e vias de estabilidade genômica. O remodelamento de cromatina desregulado e a atividade alterada de SMARCA5 têm sido implicados em fenótipos proliferativos e do neurodesenvolvimento, tornando-o um alvo útil para estudar mecanismos epigenéticos subjacentes a programas de expressão gênica relevantes para doenças.

hSNF2H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMARCA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hSNF2H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMARCA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMARCA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hSNF2H. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMARCA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hSNF2H no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hSNF2H em células tumorais com expressão de SMARCA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.