HSF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400432-ACT

O fator de choque térmico 1 (HSF1) é um regulador transcricional mestre da resposta celular ao choque térmico, que mantém a proteostase sob estresse ao induzir proteínas de choque térmico e co-chaperonas, incluindo as redes de HSP70 e HSP90. Em células humanas, o HSF1 integra sinais de estresse proteotóxico com programas de controle transcricional e traducional, moldando respostas ao estresse oxidativo, ao mau dobramento de proteínas e a desafios ambientais. A atividade do HSF1 se cruza com vias que governam o controle de qualidade de proteínas, a autofagia e decisões de sobrevivência celular, e a regulação alterada de programas de estresse ligados ao HSF1 tem sido associada à biologia do câncer e a mecanismos de doenças neurodegenerativas. Assim, modular a expressão de HSF1 é útil para dissecar os circuitos de adaptação ao estresse e a remodelação do transcriptoma a jusante em diversos modelos celulares.

HSF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSF1 em células tumorais com expressão de HSF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.