HS3ST3B1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424928

Descripción general

Hs3st3b1 codifica la heparán sulfato–glucosamina 3-O-sulfotransferasa 3B1 (HS3ST3B1), una enzima localizada en el aparato de Golgi que incorpora grupos sulfato en posición 3-O en las cadenas de heparán sulfato. Esta modificación ajusta la unión de los proteoglicanos de heparán sulfato a factores de crecimiento, quimiocinas y componentes de la matriz extracelular, dando forma a procesos de señalización y adhesión como la modulación de las vías de FGF y VEGF y la comunicación célula–célula. Las alteraciones en los patrones de sulfatación del heparán sulfato se han vinculado con gradientes de morfógenos desregulados, señalización inflamatoria e interacciones tumor–estroma, lo que hace que HS3ST3B1 sea relevante para estudios sobre la regulación del microambiente y la especificidad receptor–ligando. En sistemas murinos, la perturbación de Hs3st3b1 permite la investigación mecanística de las relaciones estructura–función de los glucosaminoglicanos en el desarrollo y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HS3ST3B1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hs3st3b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hs3st3b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hs3st3b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HS3ST3B1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hs3st3b1 para la investigación de la señalización de HS3ST3B1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hs3st3b1 críticos para la función de HS3ST3B1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hs3st3b1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hs3st3b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HS3ST3B1 (m) y el plásmido HDR HS3ST3B1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hs3st3b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hs3st3b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.