HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424928

概要

Hs3st3b1 は、ヘパラン硫酸-グルコサミン 3-O-硫酸転移酵素 3B1（HS3ST3B1）をコードしており、ゴルジ体に局在するこの酵素はヘパラン硫酸鎖に 3-O-硫酸基を付加します。この修飾は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの成長因子・ケモカイン・細胞外マトリックス成分への結合性を調節し、FGF や VEGF 経路の調節、細胞間コミュニケーションなどのシグナル伝達や接着過程を形作ります。ヘパラン硫酸の硫酸化パターンの変化は、モルフォゲン勾配の破綻、炎症シグナル、腫瘍—間質相互作用の異常と関連づけられており、HS3ST3B1 は微小環境による制御や受容体—リガンド特異性の研究において重要です。マウス系では、Hs3st3b1 の撹乱により、発生および組織恒常性におけるグリコサミノグリカンの構造—機能相関を機構的に解析できます。

HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHs3st3b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hs3st3b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hs3st3b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HS3ST3B1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HS3ST3B1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hs3st3b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HS3ST3B1の機能に不可欠なHs3st3b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hs3st3b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hs3st3b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HS3ST3B1 HDRプラスミド（m）および HS3ST3B1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHs3st3b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHs3st3b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。