HR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420945

概要

マウスのHr遺伝子は、hairless（HR）核内タンパク質をコードしており、甲状腺ホルモン受容体やレチノイン酸受容体などの核内ホルモン受容体の下流で遺伝子発現プログラムを調節する転写コリプレッサーとして機能します。HRは、皮膚および付属器組織においてクロマチンに関連した抑制機構を協調させることで、表皮の分化や毛包周期の制御に影響を与えます。Hr機能の破綻は、毛包の形態形成やケラチノサイトの恒常性を乱すため、毛の成長や皮膚バリアの生物学を司る経路の研究に広く用いられる座位となっています。したがってHrは、脱毛症様表現型の実験モデルや、皮膚発生における転写制御に関するより広範な研究において重要です。

HR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HRの機能に不可欠なHrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HR HDRプラスミド（m）および HR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。