HR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420945
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HR Anticuerpo (A-11): sc-514686
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420945 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Hr del ratón codifica la proteína nuclear hairless (HR), un correpressor transcripcional que modula programas de expresión génica aguas abajo de receptores hormonales nucleares, incluidos los receptores de hormona tiroidea y de ácido retinoico. HR influye en la diferenciación epidérmica y en el ciclo del folículo piloso al coordinar la represión asociada a la cromatina en la piel y los tejidos anexos. La alteración de la función de Hr perturba la morfogénesis folicular y la homeostasis de los queratinocitos, por lo que es un locus ampliamente utilizado para estudiar las vías que regulan el crecimiento del pelo y la biología de la barrera cutánea. Por ello, Hr es relevante para modelos experimentales de fenotipos tipo alopecia y para investigaciones más amplias sobre el control transcripcional en el desarrollo cutáneo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hr para la investigación de la señalización de HR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Hr críticos para la función de HR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hr para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HR (m) y el plásmido HDR HR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.