Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HPK1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402367-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HPK1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HPK1ダブルニカースプラスミド（h）およびHPK1ダブルニカースプラスミド（h2）は、MAP4K1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HPK1 抗体 (G-9): sc-374183
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HPK1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402367-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HPK1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402367-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP4K1は、造血系前駆細胞キナーゼ1（HPK1）をコードしており、HPK1はSte20ファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼとして、免疫細胞におけるMAPKシグナル伝達の上流調節因子として機能します。HPK1は抗原受容体および共刺激経路の下流でシグナルを伝達し、ERK/JNKカスケード、NF-κBに連結したシグナルノード、ならびに細胞骨格の再構築を調節することで、活性化の閾値形成に関与します。リン酸化依存的なアダプター分子やユビキチン・ネットワークとの相互作用を調整することにより、HPK1はT細胞受容体シグナルの強度、サイトカイン産生プログラム、そして免疫シナプスのダイナミクスに影響を与えます。MAP4K1/HPK1活性の変化は免疫シグナルの破綻状態と関連づけられており、免疫腫瘍学や炎症に焦点を当てた分子経路の研究で頻繁に解析されています。
HPK1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAP4K1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAP4K1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAP4K1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAP4K1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。