HoxC8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405407-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HoxC8 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HoxC8ダブルニカースプラスミド（h）およびHoxC8ダブルニカースプラスミド（h2）は、HOXC8を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HoxC8 抗体 (1H2): sc-517007
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HoxC8 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405407-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxC8 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405407-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXC8は、配列特異的なDNA結合性転写調節因子であるホメオボックス転写因子HoxC8をコードしており、胚発生における前後軸のパターニングを助けるとともに、中胚葉および神経堤由来組織の分化プログラムを誘導する。HoxC8は、HOX共因子との相互作用やクロマチン依存的な制御を介して、細胞運命決定、形態形成、組織特異的転写プログラムを担う遺伝子ネットワークを調節する。HOXC8の発現異常は複数の腫瘍タイプで報告されており、増殖・遊走や上皮間葉転換（EMT）に関連した転写状態の変化と関連することから、発生プログラムの再配線やがん性シグナル伝達を研究する上で有用な結節点となる。さらに、HOXC8の活性は細胞外マトリックスのリモデリングや系譜決定を司る経路とも交差しており、発生、がん生物学、転写制御に関する機構研究を支える。
HoxC8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXC8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXC8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXC8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXC8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。