HoxA10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401463-ACT

HOXA10は、ホメオボックス型転写因子であるHoxA10をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して遺伝子発現を制御することで、胚発生のパターン形成や成体組織のアイデンティティ維持に関与します。ヒト細胞においてHoxA10は、前後軸の領域化、器官形成、系譜（ラインエージ）決定に寄与し、レチノイン酸応答性経路やホルモン調節性遺伝子発現などの発生シグナルネットワークと交差する転写プログラムを協調的に制御します。特に子宮／子宮内膜の生物学および造血分化において重要であり、発現変化によって増殖・分化状態が変化し得ます。HOXA10の発現異常は発生異常と関連づけられており、生殖障害や血液悪性腫瘍に関連した転写ネットワークの再配線という観点からも研究されています。

HoxA10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOXA10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxA10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOXA10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOXA10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxA10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOXA10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxA10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOXA10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxA10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。