hnRNP A2/B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400635-ACT

HNRNPA2B1 は、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質 A2/B1（hnRNP A2/B1）をコードしており、これは RNA 結合タンパク質として、リボヌクレオタンパク質複合体内の特定の RNA モチーフを認識することで、pre-mRNA スプライシング、mRNA の安定化、核—細胞質間輸送を協調的に制御します。また、mRNA 輸送のアダプターとしても機能し、RNA 顆粒のダイナミクスにも寄与することから、ストレス応答や転写後遺伝子制御との関連が示されています。hnRNP A2/B1 は、選択的スプライシング・プログラム、RNA プロセシング、翻訳制御を担う経路にも関与し、細胞状態の遷移やプロテオーム多様性に影響を与えます。HNRNPA2B1 の機能異常は、がんや神経変性で観察されるスプライシング・ネットワークの変化や異常な RNA 代謝と関連づけられており、RNA 制御機構および疾患関連のトランスクリプトーム再編成を研究する上で有用な標的となっています。

hnRNP A2/B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HNRNPA2B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP A2/B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HNRNPA2B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHNRNPA2B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP A2/B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHNRNPA2B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP A2/B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHNRNPA2B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP A2/B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。