HNF-3γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401720-ACT

FOXA3 codifica o fator nuclear de hepatócitos 3 gama (HNF-3γ), um fator de transcrição da família forkhead box que ajuda a estabelecer e manter programas de linhagem endodérmica e regula genes envolvidos na diferenciação epitelial e na homeostase metabólica. O HNF-3γ participa de redes transcricionais que coordenam a acessibilidade da cromatina e a atividade de promotores/realçadores (enhancers), interagindo com vias que controlam o metabolismo de glicose e lipídios, a função hepática e o desenvolvimento gastrointestinal. Em células humanas, a atividade de FOXA3 contribui para decisões de identidade celular e para a remodelação dependente do contexto de circuitos regulatórios gênicos. A desregulação da expressão de FOXA3/HNF-3γ ou de programas transcricionais a jusante tem sido associada a estados de diferenciação alterados e a fenótipos relevantes para doenças na biologia do fígado e do trato gastrointestinal, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos.

HNF-3γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-3γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-3γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-3γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-3γ em células tumorais com expressão de FOXA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.