HNF-1α Plasmide Double Nickase (h): sc-400594-NIC

HNF1A codifica il fattore nucleare epatocitario 1-alfa (HNF-1α), un fattore di trascrizione contenente un homeodominio che si lega a elementi promotori ed enhancer per regolare programmi genici negli epatociti, nelle cellule β pancreatiche, nell'epitelio renale e nei tessuti intestinali. Coordina vie coinvolte nel rilevamento del glucosio e nella secrezione di insulina, nel metabolismo dei lipidi e degli acidi biliari e nella differenziazione epiteliale, in parte attraverso reti trascrizionali con HNF4A e altri fattori arricchiti nel fegato. L'alterazione dell'attività di HNF-1α modifica l'espressione di trasportatori ed enzimi metabolici, influenzando l'omeostasi cellulare e l'espressione genica specifica di linea. Varianti genetiche e funzionali in HNF1A sono associate a fenotipi metabolici monogenici e complessi, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per analizzare il controllo trascrizionale del metabolismo.

HNF-1α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HNF1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HNF1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HNF1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HNF1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.