HMGI-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420880-ACT

Hmga2 codifica a proteína arquitetônica da cromatina HMGI-C, um fator AT-hook não histônico que se liga a DNA rico em AT e remodela a cromatina local para modular programas transcricionais. Em células de camundongo, a HMGI-C contribui para a regulação da proliferação, diferenciação e do timing do desenvolvimento ao influenciar a comunicação entre enhancers e promotores e a ocupação de fatores de transcrição em todo o genoma. Ela é frequentemente associada a estados do tipo célula-tronco/progenitora e à expressão gênica ligada à transição epitélio-mesenquimal, interagindo com vias responsivas a fatores de crescimento que coordenam a progressão do ciclo celular e o comprometimento de linhagem. A expressão desregulada ou o rearranjo de HMGA2/HMGI-C está associado a crescimento aberrante e assinaturas transcricionais oncogênicas, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação gênica dirigida pela cromatina.

HMGI-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hmga2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HMGI-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hmga2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hmga2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HMGI-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hmga2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HMGI-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HMGI-C em células tumorais com expressão de Hmga2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.