HLA-DP β1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401413-ACT

HLA-DPB1 codifica a cadeia β1 do HLA-DP, um componente central dos heterodímeros do MHC de classe II que apresentam peptídeos derivados do meio extracelular a células T CD4+ e moldam o reconhecimento imune adaptativo. A expressão concentra-se em células apresentadoras de antígeno profissionais e é regulada por programas mediados por citocinas, incluindo transcrição responsiva ao interferon-γ, sustentando vias de processamento e apresentação de antígenos e o “priming” de células T. Variações nos alelos de HLA-DPB1 influenciam os repertórios de ligação a peptídeos e a responsividade imune, associando esse locus a diferenças de suscetibilidade e desfechos em condições autoimunes e inflamatórias, respostas a doenças infecciosas e alorreatividade relacionada a transplantes. Como parte da região de HLA de classe II, a cadeia β1 do HLA-DP também serve como um marcador-chave para dissecar mecanismos de apresentação de antígenos e associações imunogenéticas na biologia imune humana.

HLA-DP β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-DPB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-DP β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-DPB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-DPB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-DP β1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-DPB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-DP β1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-DP β1 em células tumorais com expressão de HLA-DPB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.