HLA-DMα Double Nickaseプラスミド (h): sc-404576-NIC

HLA-DMAは、抗原提示細胞の後期エンドソーム／リソソーム区画においてHLA-DMBとヘテロ二量体を形成する、非古典的MHCクラスII分子であるHLA-DMのα鎖をコードする。HLA-DMは、HLA-DR/DP/DQからCLIPを除去し、高親和性ペプチドのロードを安定化させることで、MHCクラスII上のペプチド交換を触媒し、CD4陽性T細胞に提示される免疫ペプチドームを形成する。この活性により、HLA-DMAは抗原プロセシングおよび提示経路、エンドソーム輸送、ならびに獲得免疫の活性化と結び付けられる。HLA-DMシステムの構成要素を含むHLAクラスII領域における遺伝的多様性や発現変化は、免疫調節異常や自己免疫・炎症性疾患の表現型に対する感受性と関連することが示されている。

HLA-DMα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HLA-DMA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HLA-DMA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HLA-DMAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HLA-DMAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。