HIVEP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410084-ACT

HIVEP3 (umano) codifica un grande fattore di trascrizione a dita di zinco, noto anche come Schnurri-3, che si lega a elementi di DNA simili a κB e modula programmi trascrizionali dipendenti dallo stimolo. È stato associato alla regolazione dell’espressione genica legata a NF-κB e, più in generale, al controllo degli output di segnalazione immunitaria e infiammatoria, integrando input provenienti da vie mediate da recettori per plasmare le risposte trascrizionali a valle. L’attività di HIVEP3 influenza la differenziazione cellulare e l’omeostasi attraverso un controllo trascrizionale specifico del contesto, con una rilevanza riportata per la disregolazione immunitaria e per firme di espressione complesse associate a malattia. Queste proprietà rendono HIVEP3 un nodo utile per studiare reti trascrizionali che collegano la segnalazione alla regolazione genica.

HIVEP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HIVEP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HIVEP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HIVEP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HIVEP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HIVEP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HIVEP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HIVEP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HIVEP3 nelle cellule tumorali con espressione di HIVEP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.