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HIVEP3CRISPR激活质粒(h) | sc-410084-ACT | 20 µg | $397.00 |
HIVEP3(人)编码一种大型锌指转录因子,也称为 Schnurri-3。它可结合类似 κB 的 DNA 元件,并调控刺激依赖性的转录程序。研究表明,HIVEP3 与 NF-κB 相关基因表达的调节有关,并更广泛地参与对免疫与炎症信号输出的控制:它整合来自受体介导通路的输入,从而塑造下游的转录应答。HIVEP3 的活性通过情境特异性的转录调控影响细胞分化与稳态维持,并被报道与免疫失调及复杂疾病相关的表达特征有关。这些特性使 HIVEP3 成为研究“信号传导—基因调控”耦联的转录网络时一个有价值的关键节点。
HIVEP3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HIVEP3的表达。
HIVEP3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的HIVEP3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于HIVEP3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性HIVEP3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的HIVEP3位点,并能够研究内源性位点上依赖于HIVEP3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HIVEP3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HIVEP3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。