Histone cluster 1 H1E Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402775-ACT

O HIST1H1E codifica a histona H1E do cluster 1, um membro da família de histonas ligantes H1 que se liga ao DNA nucleossômico nos sítios de entrada/saída, promovendo a compactação da cromatina em níveis mais elevados e regulando a acessibilidade do genoma. Ao influenciar o espaçamento entre nucleossomos e a organização da fibra de cromatina, a H1E contribui para o controle transcricional, o timing de replicação do DNA e a sinalização da resposta a danos no DNA. Alterações na estequiometria de H1 e estados de cromatina associados à H1E são estudados no contexto de reprogramação epigenética, diferenciação e estabilidade genômica, processos frequentemente perturbados no câncer e em transtornos do neurodesenvolvimento. Como proteína arquitetônica da cromatina, a H1E também é relevante para investigações sobre estresse de replicação, formação de heterocromatina e ocupação de fatores de transcrição ao longo do genoma.

Histone cluster 1 H1E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIST1H1E sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone cluster 1 H1E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIST1H1E em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIST1H1E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone cluster 1 H1E. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIST1H1E nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone cluster 1 H1E no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone cluster 1 H1E em células tumorais com expressão de HIST1H1E silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.