Histamine H1 Receptor Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401393-NIC

HRH1 codifica o receptor humano de histamina H1 (H1R), um receptor acoplado à proteína G (GPCR) de classe A, predominantemente acoplado a Gq/11, que converte a sinalização por histamina em ativação da fosfolipase C, geração de fosfatos de inositol, mobilização intracelular de Ca2+ e programas dependentes de proteína quinase C. A sinalização do H1R interage com as vias MAPK/ERK e NF-κB para regular o tônus e a permeabilidade vasculares, a contração do músculo liso e a expressão de genes inflamatórios em contextos imunes e epiteliais. Alterações na atividade e na expressão de HRH1 têm sido associadas à hiper-reatividade das vias aéreas, inflamação alérgica, prurido e modulação neuroimune, tornando-o um alvo útil para estudar a regulação histaminérgica da função de barreira e neuronal. O HRH1 também é usado como um GPCR modelo para investigar dessensibilização do receptor, tráfego mediado por β-arrestina e sinalização com viés de ligante.

Histamine H1 Receptor O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HRH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HRH1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HRH1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HRH1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.