Plásmido Doble Nickase (h) Histamine H1 Receptor: sc-401393-NIC

HRH1 codifica el receptor humano de histamina H1 (H1R), un receptor acoplado a proteína G (GPCR) de clase A principalmente acoplado a Gq/11, que convierte la señalización de la histamina en activación de la fosfolipasa C, generación de fosfatos de inositol, movilización de Ca2+ intracelular y programas dependientes de la proteína quinasa C. La señalización de H1R converge con las vías MAPK/ERK y NF-κB para regular el tono y la permeabilidad vasculares, la contracción del músculo liso y la expresión de genes inflamatorios en contextos inmunitarios y epiteliales. La actividad y la expresión alteradas de HRH1 se han asociado con hiperreactividad de las vías respiratorias, inflamación alérgica, prurito y modulación neuroinmunitaria, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación histaminérgica de la función de barrera y neuronal. HRH1 también se utiliza como GPCR modelo para investigar la desensibilización del receptor, el tráfico mediado por β-arrestina y la señalización sesgada por ligandos.

Histamine H1 Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HRH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HRH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HRH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HRH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.