Histamine H1 Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401393-ACT

HRH1 codifica o receptor humano de histamina H1, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) que se acopla principalmente a Gq/11 para ativar a fosfolipase Cβ, aumentar o Ca2+ intracelular e estimular a sinalização dependente de PKC. As vias a jusante incluem cascatas MAPK/ERK e programas transcricionais que regulam a permeabilidade vascular, o tônus do músculo liso e a comunicação neuroimune. A atividade de HRH1 modula o tráfego de células inflamatórias e a produção de citocinas e tem sido associada à inflamação alérgica, prurido, hiperresponsividade das vias aéreas e fenótipos relacionados à neurotransmissão relevantes para a regulação do ciclo sono–vigília. Em modelos celulares, HRH1 oferece um alvo acessível para investigar a dinâmica de sinalização de GPCRs, o acoplamento de segundos mensageiros e a expressão gênica dependente do estímulo.

Histamine H1 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HRH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histamine H1 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HRH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HRH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histamine H1 Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HRH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histamine H1 Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histamine H1 Receptor em células tumorais com expressão de HRH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.