HIF PHD1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402824-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HIF PHD1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HIF PHD1ダブルニカースプラスミド（h）およびHIF PHD1ダブルニカースプラスミド（h2）は、EGLN2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HIF PHD1 抗体 (2G3): sc-293220
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HIF PHD1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF PHD1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのEGLN2は、低酸素誘導因子（HIF）のプロリン水酸化酵素1（HIF PHD1）をコードしている。PHD1はFe(II)/2-オキソグルタル酸（2-OG）依存性ジオキシゲナーゼであり、常酸素下でHIF-αサブユニットを水酸化して、VHLによるユビキチン化およびプロテアソーム分解を促進する。酸素の利用可能性を転写プログラムに結びつけることで、PHD1は細胞代謝、血管新生シグナル、赤血球産生、適応的ストレス応答を制御するHIF駆動経路の調整に寄与する。EGLN2の活性は2-オキソグルタル酸代謝を介してミトコンドリア機能や酸化還元バランスとも連動し、酸素センシングをより広範な代謝制御へと結び付けている。EGLN2/PHD1シグナルの破綻は、複数の疾患関連モデルで観察される低酸素応答の変調や代謝リモデリングの文脈で関与が示唆されており、酸素依存的な遺伝子制御の機構研究を後押ししている。
HIF PHD1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EGLN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EGLN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EGLN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EGLN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。