Hepsin Double Nickaseプラスミド (h): sc-405081-NIC

HPNはヘプシン（hepsin）をコードしており、ヘプシンはII型膜貫通型セリンプロテアーゼの一種です。細胞表面に豊富に局在し、細胞周囲のタンパク質分解、細胞外マトリックスのリモデリング、ならびに細胞—細胞間および細胞—マトリックス間相互作用の制御に関与します。ヘプシンは細胞外基質をプロセシングすることで、プロテアーゼ活性化シグナル伝達や増殖因子の利用可能性に影響し、上皮の分化、組織構築、浸潤性挙動を形づくる経路と関連づけられています。HPN発現の制御異常やヘプシン活性の変化は複数の上皮性悪性腫瘍で報告されており、腫瘍関連プロテアーゼネットワークや微小環境とのクロストークを研究するうえで有用な分子標的となっています。生物医学研究では、HPNは膜アンカー型プロテアーゼカスケード、細胞移動、ならびに形質膜におけるプロテオスタシスへの関与という観点から、しばしば解析されています。

Hepsin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HPN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HPN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HPNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HPNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。