hepcidin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429976

概要

マウスのHampは、肝臓由来のペプチドホルモンであり、全身の鉄恒常性を統括的に制御する中心因子であるヘプシジンをコードする。ヘプシジンは鉄輸送体フェロポルチン（SLC40A1）に結合してその内在化と分解を誘導し、腸管からの鉄吸収を制限するとともに、マクロファージや肝細胞からの鉄放出を制御する。ヘプシジンの転写は、IL-6/STAT3などの炎症性シグナルや、BMP/SMADを含む鉄感知経路によって調節され、自然免疫と鉄代謝を統合している。ヘプシジン―フェロポルチン軸の破綻は、鉄過剰や鉄制限といった病態に関与するとされ、炎症性貧血、ヘモクロマトーシス様表現型、感染に伴う栄養免疫のモデルで広く研究されている。

hepcidin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHamp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hamp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hampのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、hepcidinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、hepcidinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hamp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• hepcidinの機能に不可欠なHampエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hampゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• hepcidin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびhepcidin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hamp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  hepcidin HDRプラスミド（m）および hepcidin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHampホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHamp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。