hepcidin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403222
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- hepcidin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico hepcidin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:hepcidin Anticorpo (56-Z): sc-100277
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
hepcidin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403222 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
HAMP codifica a hepcidina, um hormônio peptídico produzido no fígado que é o regulador central da homeostase sistêmica do ferro. A hepcidina se liga ao exportador de ferro ferroportina (SLC40A1) e promove sua internalização, limitando assim a absorção de ferro na dieta no intestino e a liberação de ferro por macrófagos e hepatócitos. Sua transcrição integra sinais da via BMP/SMAD, da sinalização de citocinas inflamatórias (notadamente IL-6/STAT3), de hipóxia/demanda eritropoiética e da saturação de transferrina circulante para manter o equilíbrio do ferro. A expressão desregulada de HAMP está associada a fenótipos de sobrecarga de ferro e à restrição de ferro relacionada à anemia, tornando-o um ponto-chave para o estudo do metabolismo do ferro e dos mecanismos de sequestro de ferro induzidos por inflamação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO hepcidin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HAMP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HAMP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HAMP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína hepcidin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HAMP para a investigação da sinalização de hepcidin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HAMP críticos para a função hepcidin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HAMP para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo hepcidin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo hepcidin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HAMP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo hepcidin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR hepcidin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HAMP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HAMP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.