Plásmido CRISPR de Activación (h) HEL308: sc-404447-ACT

HELQ codifica la helicasa de ADN humana HEL308, una helicasa SF2 dependiente de ATP que ayuda a resolver intermediarios de replicación del ADN detenidos y promueve la estabilidad del genoma durante el estrés replicativo. HEL308 participa en vías relacionadas con la reparación del ADN y el procesamiento de horquillas de replicación, incluidos mecanismos que se interconectan con la recombinación homóloga y la red de anemia de Fanconi para la tolerancia a los entrecruzamientos interhebra. Al favorecer una replicación del ADN fiel y la señalización de respuesta al daño, HELQ influye en resultados celulares como la activación de puntos de control, la integridad cromosómica y la supervivencia frente al estrés genotóxico. En la bibliografía, las alteraciones en la función o la expresión de HELQ se han asociado con fenotipos de inestabilidad genómica y con contextos de susceptibilidad relevantes para la biología del cáncer y trastornos asociados a la reparación del ADN.

HEL308 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HELQ sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HEL308 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HELQ en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HELQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HEL308. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HELQ y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HEL308 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HEL308 en células tumorales con expresión de HELQ silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.