HECTD1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409864-NIC

HECTD1は、タンパク質のユビキチン化とプロテアソーム依存的な分解（ターンオーバー）を制御し、シグナル伝達および細胞骨格の構築に影響を与えるHECTドメイン型E3ユビキチンリガーゼをコードする。ユビキチン駆動型の品質管理の調節因子として、HECTD1は基質タンパク質の安定性や細胞内輸送を制御することを通じて、ストレス応答シグナル、細胞移動、発生制御などの過程に関与すると関連付けられている。HECTD1活性の攪乱は、細胞周期の進行や形態形成プログラムに影響する経路ダイナミクスを変化させ得るため、異常増殖や組織パターニングの研究において重要である。さらに、そのユビキチンリガーゼ機能により、ユビキチン化、タンパク質恒常性、転写応答の間のクロストークを解析する上で有用な結節点（ノード）としても位置付けられる。

HECTD1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HECTD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HECTD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HECTD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HECTD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。