HECTD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409864

Visão geral

HECTD1 codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo HECT que medeia a ubiquitinação de substratos para regular a proteostase, a renovação proteica e a amplitude de sinalização em múltiplos contextos celulares. Ao controlar o tráfego e a degradação dependentes de ubiquitina de componentes de vias de sinalização, a HECTD1 pode influenciar processos como a progressão do ciclo celular, respostas ao stresse e a dinâmica do citoesqueleto, que dependem de uma remodelação atempada das redes proteicas. A atividade desregulada de ligases E3 está frequentemente associada a alterações na fidelidade da sinalização e a fenótipos celulares aberrantes, tornando a HECTD1 um nó relevante para estudar a função do sistema ubiquitina–proteassoma em células humanas. A investigação sobre a HECTD1 apoia estudos mecanísticos de como a ubiquitinação se articula com programas de sinalização importantes para o desenvolvimento e associados a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HECTD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HECTD1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HECTD1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HECTD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HECTD1 para a investigação da sinalização de HECTD1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HECTD1 críticos para a função HECTD1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HECTD1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HECTD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HECTD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HECTD1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HECTD1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HECTD1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HECTD1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HECTD1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.