HECTD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409864

概要

HECTD1は、HECT型のE3ユビキチンリガーゼをコードしており、基質のユビキチン化を介して、さまざまな細胞環境におけるプロテオスタシス、タンパク質ターンオーバー、ならびにシグナル伝達の強度（振幅）を調節する。ユビキチン依存的な経路構成因子の輸送や分解を制御することで、HECTD1は、タンパク質ネットワークの適時な再編成に依存する細胞周期の進行、ストレス応答、細胞骨格ダイナミクスなどの過程に影響を及ぼし得る。E3リガーゼ活性の破綻は、シグナル伝達の忠実性の変化や異常な細胞表現型としばしば関連するため、HECTD1はヒト細胞におけるユビキチン–プロテアソーム系の機能を研究するうえで重要なノードとなる。HECTD1に関する研究は、ユビキチン化が発生に重要な、また疾患に関連するシグナル伝達プログラムとどのように結び付くのかを機構的に解明するための検討を支える。

HECTD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHECTD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HECTD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HECTD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HECTD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HECTD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HECTD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HECTD1の機能に不可欠なHECTD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HECTD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HECTD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHECTD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HECTD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HECTD1 HDRプラスミド（h）および HECTD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHECTD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHECTD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。