HE4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402876-ACT

WFDC2 codifica a HE4 (proteína 4 do epidídimo humano), uma glicoproteína secretada contendo um domínio de proteína ácida do soro (WAP), implicada na regulação de proteases extracelulares e na remodelação do microambiente pericelular. A expressão de HE4 está ligada a programas de diferenciação epitelial e pode influenciar interações célula–célula, adesão e proteostase na via secretora e no espaço extracelular. Níveis desregulados de WFDC2/HE4 têm sido associados a alterações da homeostase tecidual e a contextos de sinalização inflamatória em múltiplos cenários de doença derivados de epitélio. Como proteína circulante e associada a tumores em vários perfis de expressão relacionados a neoplasias, HE4 é frequentemente utilizada como um indicador molecular de ativação de vias e para estratificação de fenótipos em pesquisa translacional.

HE4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WFDC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HE4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WFDC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WFDC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HE4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WFDC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HE4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HE4 em células tumorais com expressão de WFDC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.