HCN2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405074-ACT

HCN2は、過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル2（HCN2）をコードしており、Ih電流を担う孔形成サブユニットとして機能し、膜の過分極を脱分極方向の内向き陽イオン流入へと結び付けます。電位感知と環状ヌクレオチドによる直接的な調節を統合することで、HCN2はニューロンの興奮性、ペースメーカー活動、リズミックな発火特性の微調整に寄与し、信号統合やネットワーク振動に影響を与えます。HCN2の機能はcAMP/PKAに連動したシグナル伝達や、シナプス応答性および興奮性依存的な遺伝子制御を形作る広範な電気生理学的プログラムとも交差します。HCN2の発現やチャネル活性の調節異常は、神経系および感覚系の疾患に関連する興奮性表現型の変化と関連付けられており、興奮性組織や疾患関連の細胞モデルにおける機序解明研究を支持します。

HCN2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HCN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HCN2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HCN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHCN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HCN2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHCN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHCN2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHCN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHCN2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。