Hck CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420810

概要

マウスHckは、造血細胞キナーゼ（hematopoietic cell kinase）をコードする遺伝子であり、骨髄系細胞系列に豊富に発現するSrcファミリーの非受容体型チロシンキナーゼで、免疫受容体およびインテグリンからのシグナルを下流のリン酸化ネットワークへと連結します。HckはFc受容体およびToll様受容体（TLR）に関連する経路に関与し、細胞骨格の再構築、貪食、脱顆粒、炎症性メディエーター産生を協調的に制御します。これらのシグナルはPI3K/AKT、MAPK、NF-κBなどのノードに収束します。Hck活性の変化は、炎症性疾患や白血病モデルにおいて、自然免疫シグナルの制御異常や骨髄系細胞の異常な挙動と関連づけられています。近位シグナル伝達キナーゼとして、Hckはマクロファージおよび好中球の活性化、接着、遊走を制御する機構を解析するために広く用いられています。

Hck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHck遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hck内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hckのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hckタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hckシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hck欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hckの機能に不可欠なHckエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hckゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hck遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hck HDRプラスミド（m）および Hck HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHckホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHck標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。