Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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hamartin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402444
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- hamartin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico hamartin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: hamartin Antibody (C-8): sc-377386
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
hamartin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402444 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TSC1 codifica l’hamartina, una proteina scaffold che forma un complesso funzionale con TSC2 (tuberina) per limitare la segnalazione di mTORC1 regolando la piccola GTPasi Rheb. Attraverso questo asse oncosoppressore, l’hamartina integra input provenienti da PI3K–AKT, AMPK e segnali di stress cellulare per coordinare la sintesi proteica, l’autofagia, il metabolismo e la crescita cellulare. La perdita o la disfunzione di TSC1 altera l’omeostasi dipendente da mTOR, modificando la dinamica lisosomiale e del citoscheletro e perturbando lo sviluppo neuronale e gliale. Queste vie sono centrali nei meccanismi studiati nella biologia del complesso della sclerosi tuberosa e, più in generale, nei fenotipi di crescita e differenziamento cellulare guidati da mTOR.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hamartin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TSC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TSC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TSC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hamartin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TSC1 per lo studio della segnalazione di hamartin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TSC1 critici per la funzione di hamartin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TSC1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal hamartin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal hamartin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TSC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal hamartin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR hamartin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TSC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TSC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.