Plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHB (m): sc-433034

Présentation

Le gène murin *Hadhb* code la sous-unité bêta de la protéine trifonctionnelle mitochondriale (HADHB), un complexe enzymatique essentiel qui catalyse des étapes clés de la β‑oxydation des acides gras à longue chaîne, notamment les activités énoyl‑CoA hydratase et 3‑hydroxyacyl‑CoA déshydrogénase. En soutenant le métabolisme énergétique mitochondrial, HADHB contribue au maintien de l’homéostasie lipidique et influence les réponses cellulaires à la disponibilité des nutriments et au stress métabolique. Une perturbation de l’oxydation mitochondriale des acides gras peut déséquilibrer l’état rédox et la production d’ATP, avec des effets en aval sur les tissus à forte demande oxydative. Une altération de la fonction de HADHB est donc pertinente pour l’étude des dysfonctions mitochondriales et des pathologies associées aux lipides, notamment des phénotypes cardiométaboliques et neuromusculaires modélisés chez la souris.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hadhb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hadhb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hadhb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HADHB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hadhb pour l'étude de la signalisation de HADHB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hadhb essentiels à la fonction de HADHB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hadhb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HADHB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HADHB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hadhb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HADHB plasmide HDR (m) et le HADHB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hadhb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hadhb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.