HADHB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433034

Panoramica

Mouse Hadhb codifica la subunità beta della proteina trifunzionale mitocondriale (HADHB), un complesso enzimatico essenziale che catalizza passaggi chiave della β-ossidazione degli acidi grassi a catena lunga, incluse le attività di enoil-CoA idratasi e 3-idrossiacil-CoA deidrogenasi. Sostenendo il metabolismo energetico mitocondriale, HADHB contribuisce a mantenere l’omeostasi lipidica e influenza le risposte cellulari alla disponibilità di nutrienti e allo stress metabolico. L’alterazione della β-ossidazione mitocondriale degli acidi grassi può perturbare l’equilibrio redox e la produzione di ATP, con effetti a valle sui tessuti con elevata richiesta ossidativa. Una funzione HADHB alterata è quindi rilevante per studi sulla disfunzione mitocondriale e sulle patologie associate ai lipidi, inclusi fenotipi cardiometabolici e neuromuscolari modellati nel topo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HADHB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hadhb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hadhb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hadhb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HADHB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hadhb per lo studio della segnalazione di HADHB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hadhb critici per la funzione di HADHB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hadhb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HADHB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HADHB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hadhb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HADHB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HADHB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hadhb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hadhb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.