GTPBP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408845-ACT

O GTPBP4 humano codifica uma NTPase do tipo P-loop nucleolar que se associa a partículas pré-ribossomais e dá suporte à maturação da subunidade ribossomal grande 60S. Por meio de seus papéis no processamento de rRNA e na biogênese de ribossomos, o GTPBP4 influencia a capacidade translacional, a proteostase e a progressão do ciclo celular em condições de crescimento e de estresse. A perturbação da função nucleolar e da montagem de ribossomos é uma característica marcante de múltiplos estados proliferativos e de resposta ao estresse, tornando o GTPBP4 um ponto útil para dissecar as conexões entre a vigilância nucleolar, a sinalização associada à p53 e o controle global da tradução. A regulação aberrante de fatores de biogênese ribossomal, incluindo GTPases como o GTPBP4, tem sido relacionada na literatura a programas oncogênicos e a alterações na aptidão celular, o que reforça sua relevância para estudos mecanísticos em modelos de doença.

GTPBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GTPBP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GTPBP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GTPBP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GTPBP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GTPBP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GTPBP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GTPBP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GTPBP4 em células tumorais com expressão de GTPBP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.