G_{γ 5} CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407524

概要

GNG5は、活性化したGタンパク質共役受容体（GPCR）を下流シグナルへとつなぐ三量体Gタンパク質の中核構成要素であるヒトGγ5サブユニットをコードします。Gβサブユニットと複合体を形成してGβγダイマーとなり、エフェクター酵素やイオンチャネルを制御することで、アデニリルシクラーゼ/cAMP、ホスホリパーゼCβ/IP3–DAG、PI3K–AKTシグナル伝達などのセカンドメッセンジャー経路を調節します。Gγ5依存的なシグナルは、細胞移動、膜興奮性、細胞骨格のリモデリングなどの過程に影響し、GPCR/Gタンパク質経路の活性変化は、がん生物学、炎症、ならびに心血管系・神経系の機能障害にしばしば関与するとされています。

Gγ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGNG5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNG5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNG5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gγ 5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gγ 5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNG5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gγ 5の機能に不可欠なGNG5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNG5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gγ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGγ 5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNG5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gγ 5 HDRプラスミド（h）および Gγ 5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNG5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNG5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。